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色谱峰是什么样的呢?
根据塔板理论,应该是正态分布曲线。但理论是理论,现实很悲剧,真实的色谱峰形很少是正态分布的,而是各种形状。
幸好,我们并不关心峰型,只要面积好就ok了。等等,这里有一个问题,就是峰宽。峰形状变了,峰宽加大了,经常造成分离度下降,分不开了,这就是问题了;而且拖尾严重,积分不好了,也影响定量的。所以我们关心峰宽。
色谱峰为什么这么宽呢?
一个谱图上,为什么先出来的峰就窄,吼出来的就宽呢?
哦,你会说这是塔板理论的正常推论,合乎道理的。但为什么另一张谱图上,先出来的峰和后面出来的峰一样宽,中间却有两个大峰非常宽呢?为什么有的峰拖尾了,峰宽变的大很多呢?
嗯。。。这是因为,色谱峰宽是由很多因素构成的,每个因素影响程度不同,造成的结果也不同,谁的影响力大,就主要显示谁的作用结果。那么色谱峰宽,到底由哪几部分构成?那么我们来谈一谈。
色谱峰宽由两部分构成:一、对称峰宽。二、拖尾峰宽。
所谓对称峰宽,就是指这种峰宽不会造成峰型不对称,不会出现拖尾前伸。而拖尾峰宽,就是指这个峰宽构成,会导致峰形状变的不对称。我们首先要研究的是对称峰宽,这个导致了峰宽的主要构成。
一、对称峰宽。
对称峰宽主要包括两部分:
1、塔板理论正常展宽,这个很简单。
根据塔板理论,进样时处于0号塔板的组分,离开色谱柱时已经占据了很多块塔板,导致峰宽加大,并形成正态分布的峰型。这个在前面的塔板理论中有描述,在各种色谱书上都有详细说明,这里不再多谈。
2、正常的进样展宽。
嗯,正常的,因为还有不正常的,很多种不正常的。
根据塔板理论,样品进样时都停留在0号塔板上,但这是不可能的。因为一个塔板的体积是如此的小,以至于根本放不下衬管里面哪怕是经过分流之后的样品。比如你的衬管有0.5ml,分流比50倍,那么进入色谱柱的体积大约有10立方毫米。但你的毛细管柱内径就算是0.53mm的,可是这是直径啊,算下来,这些样品都进去,也要占据大约50mm长的柱子。也就是说,0号塔板放不下,要放到。。。。算你的柱子是50m,那么就是柱效的千分之一了,毛细管柱,算你10万块板,那么也是100块塔板了。嗯。。。我信手瞎算,大家可以帮我算算对不对。
那么说,进样宽度就是100块塔板了?
错。进样宽度没有这么大,只有这个数值除以分配比k之后的塔板数。为什么要除以分配比?因为色谱柱固定相可以溶解很多样品中待测组分,所以待测组分在这100块板上浓度不同,只有前面1/k的塔板上浓度比较高。
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