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2.1 样品采集
在平水期,选取塘西河、南淝河、板桥河、店埠河和派河等合肥市典型的入湖河流.根据该区域可能的污染源分布和环境特征,选择河流入湖口、河流交汇处、污水处理厂排水口的上下游、工业密集区排水口等设置采样点,采集24个水样和27个沉积物样,具体采样点如图 1所示.其中,南淝河为主要入湖河流,流经人口密集区,接纳大量生活污水和工业废水,因此,该河流共采集10个水样(W5、W6、W8、W9、W10等,图中仅对文中分析过程中涉及的特征采样点予以编号)和13个沉积物样(S5、S6、S9、S10、S15等).按照《水样的采集与保存》(GB/T5750.2—2006),以铁桶采集水面下0.5 m左右的水样,每1 h采集1次,连续采集4 h,混成一个混合样后运回实验室立即进行固相萃取富集.使用抓斗式采泥器采集表层0~5 cm的沉积物,每个样点在上下游20 m范围内采集5次沉积物,以四分法取每一子样以混成混合样.以铝箔纸包好,放入冷藏箱带回实验室.样品室温下自然风干,去除石块及动植物残体等杂物后,粉碎机磨碎过100目铜筛,混匀后置于-20 ℃条件下冷冻保存以备用.
图 1
图 1采样点位置分布示意图
2.2 仪器与材料
仪器:Agilent 7890A-5975型气相色谱-质谱联用仪、ESJ120-4B电子天平(沈阳龙腾电子有限公司)、KX-2013TD超声波清洗机(北京科玺时代有限公司)、2-16PK高速冷冻离心机(德国Sigma公司)、RE52CS-1旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)、D10-12氮吹仪(杭州奥盛仪器有限公司)、Millipore Express超纯水机.
12种有机紫外吸收剂中,二苯甲酮(BP,99.5%)、水杨酸-2-乙基己基酯(EHS,99.4%)、胡莫柳酯(HMS,100%)、二苯甲酮-3(BP-3,100%)、4-甲基苄亚基樟脑(4-MBC,100%)、对氨基苯甲酸乙酸已酯(OD-PABA,97%)、奥克立林(OC,≥98%)、4-甲氧基肉桂酸-2-乙基己酯(EHMC,97.5%)、2-(3, 5-叔丁基-2-羟基苯)-2H-苯并三唑(UV-320,99.1%)、2-(5-氯-2-苯三唑基)-6-叔丁基对甲酚(UV-326,99.2%)购自百灵威科技有限公司;2-(2'-羟基-3', 5'-二叔丁基苯基)-5-氯代苯并三唑(UV-327, > 98%)和2-(2'-羟基-5'-叔辛基苯基)苯并三唑(UV-329,> 98%)购自日本TCI公司.内标物氘代菲(Phenanthrene-d10,98.6%)购自百灵威科技有限公司.
正己烷、二氯甲烷、甲醇均为色谱纯(J.T.Baker);无水硫酸钠为分析纯(国药集团化学试剂有限公司),使用前需在450 ℃的马弗炉中烘烤4 h,放置常温后移至干燥器中备用;柱层层析硅胶(100~200目)(青岛海洋化工有限公司)使用前以160 ℃活化12 h,再加3%(质量分数)超纯水,摇匀后置于干燥器中备用.
2.3 样品前处理
以0.7 μm的玻璃纤维膜过滤水样,然后取1 L水样,以5~10 mL˙min-1流速通过活化的固相萃取柱(Oasis HLB 6 mL 500 mg).以6 mL二氯甲烷/甲醇(V/V,9: 1)洗脱液淋洗固相萃取柱.加适量无水硫酸钠去水,旋转蒸发浓缩后以微弱的氮气吹至近干,加入100 μg˙L-1的内标物菲-d10后定容至0.20 mL,待GC-MS分析.
称取10.0 g冷干的沉积物于50 mL聚四氟乙烯离心管中,再加入20 mL甲醇,超声提取20 min,再以4000 r˙min-1离心5 min,取上清液.提取过程重复2次,合并所有提取液,旋转蒸发浓缩至0.5 mL后通过装有硅胶的层析柱(内径10 mm)净化.以30 mL二氯甲烷/甲醇(V/V,1: 1)洗脱目标物.旋转蒸发浓缩后以微弱的氮气吹至近干,加入100 μg˙L-1的内标物菲-d10后定容至0.50 mL,待GC-MS分析.
2.4 仪器条件
色谱条件:DB-5MS毛细管柱,30 m×0.25 mm×0.25 μm.水样升温程序:初始温度80 ℃,保持1 min;以10 ℃˙min-1升温至190 ℃并保持1 min,再以20 ℃˙min-1升至300 ℃保持15 min.沉积物升温程序:初始温度80 ℃,保持2 min;以10 ℃˙min-1升温至300 ℃,保持15 min.载气为高纯氦气(纯度 > 99.9999%),载气流速为1 mL˙min-1.不分流进样,进样量为1 μL.进样口温度280 ℃.
质谱条件:采用电子轰击电离方式(EI)进行离子化,EI电离能为70 eV,离子源温度为230 ℃,四级杆温度为150 ℃,溶剂延迟4 min.采用选择离子扫描模式(SIM).
2.5 分析质量控制
为避免环境中有机紫外吸收剂对实验的影响,实验过程中实验器皿尽量采用玻璃制品,实验器皿经丙酮清洗干净后,放入烘箱迅速烘干,待实验使用.分析过程中增加方法空白、加标空白、基质加标分析进行质量控制和质量保证.每批分析样品增加1个空白样以检验试剂和容器的清洁程度,每12个样品增加2个含12种组分混标的基质加标样.
以12种紫外吸收剂单标对目标化合物进行定性分析,混标对其进行定量分析.以内标法绘制标准曲线,线性范围为10~400 μg˙L-1.水样中12种紫外吸收剂的平均加标回收率为85.6%~112%,检出限(PK-PK S/N=3)为0.45~2.43 ng˙L-1;沉积物中12种紫外吸收剂的平均加标回收率为71.9%~131%,检出限(PK-PK S/N=3)为0.07~0.28 ng˙g-1.
2.6 风险评估方法
根据欧盟风险评价技术指南(European Union, 2003a),采用评价因子(AF)法计算污染物的预测无效应浓度(PNEC),即利用各物质对应的毒性数据—半致死浓度(LC50)或半最大效应浓度(EC50)或无观察效应浓度(NOEC)的最小值除以相应AF值.以风险商(RQ)法,即RQ=MEC/PNEC(MEC为污染物的环境浓度;PNEC= LC50(EC50)/AF或PNEC=NOEC/AF)评价目标化合物的风险.表 1为本研究评价因子AF的取值.
通过数据库和文献检索,获取了部分有机紫外吸收剂的LC50或EC50.由于缺乏毒性数据,关于苯并三唑类有机紫外吸收剂(UV326、UV327、UV329)及EHS、HMS、OC的LC50或EC50,采用US EPA提供的ECOSAR软件(基于化学结构预测其对水生生物或生态系统毒性)进行了估算(徐蕾, 2016).本研究中UV320含量和检出率均较低,因此,未计算其LC50或EC50.ECOSAR软件通常采用鱼、大型溞、绿藻类等水生生物.选取高礼等(2015)推荐的评价因子AF值(100或1000)计算有机紫外吸收剂的PNEC值.
水中,当RQ < 0.01时,表明没有风险;0.01≤RQ < 0.1为较低风险;0.1≤RQ < 1为中等风险;RQ≥1则为较高风险(Tsui et al., 2014; Hernando et al., 2006).
沉积物中,3 < logKow < 5的物质,当RQ < 0.1时表示没有风险,0.1≤RQ < 1为较低风险,1≤RQ < 10为中等风险,RQ≥10则为较高风险(Da et al., 2010; 唐量, 2012).logKow > 5的物质,RQ > 10则存在生态风险.因为logKow > 5的物质更易被沉积物吸附,对生物的危害降低,可适当放宽评价标准.而logKow < 3的物质,不易被沉积物吸附,因此不予考虑(European Union, 2003b).将沉积物中污染物浓度按照平衡状态下污染物在沉积物/水分配的经验关系(Liu et al., 2015),转化为孔隙水中污染物浓度,计算沉积物的RQ值.
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