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附录 B
(资料性附录)
15 种醛、酮类腙衍生物的参考色谱图
图 B.1~B.2 给出了不同色谱柱,在相应的色谱分离条件下的参考色谱图。
色谱柱 1:5.0 µm 粒径亲水型烷基键合多孔硅胶固定相
流动相:乙腈/水。流速 1.5 ml/min,梯度洗脱,60%乙腈保持 8 min,8 min~18 min 内乙腈从60%线性增至 70%,18 min~25 min 内乙腈从 70%线性增至 80%,25 min~26 min 内乙腈从 80%线性降至 60%,保持 5 min。
色谱柱 2:5.0 µm 粒径十八烷基硅烷键合多孔硅胶固定相
流动相:乙腈/水。流速 1.5 ml/min,梯度洗脱,60%乙腈保持 8 min,8 min~18 min 内乙腈从60%线性增至 70%,18 min~25 min 内乙腈从 70%线性增至 80%,25 min~26 min 内乙腈从 80%线性降至 60%,保持 5 min。
注:1.甲醛-DNPH;2.乙醛-DNPH;3.丙烯醛-DNPH;4.丙酮-DNPH;5.丙醛-DNPH;6.丁烯醛-DNPH;7.丁醛-DNPH; 8.苯甲醛-DNPH;9.异戊醛-DNPH;10.正戊醛-DNPH;11.邻-甲基苯甲醛-DNPH;12.间-甲基苯甲醛-DNPH;13.对-甲基苯甲醛-DNPH;14.正己醛-DNPH;15. 2,5-二甲基苯甲醛-DNPH。
附录 C
(资料性附录)
方法的精密度和准确度
附表 C.1 和附表 C.2 给出了方法的重复性限、再现性限和加标回收率等精密度和准确度指标。
附 录 D
(资料性附录)
2,4-二硝基苯肼(DNPH)的纯化及空白检验
D.1 2,4-二硝基苯肼的纯化
D.1.1 在通风橱中,向盛有 200 ml 乙腈的烧杯中加入 100 g 的 DNPH,煮沸 1 h 后,将上清液转移至干净的烧杯中,盖上表面皿后,把烧杯放在 40℃~60℃电热板上,使溶液逐步冷却,温度保持在40℃~60℃,直至 95%的溶剂蒸发。
D.1.2 将烧杯中剩余的溶液倒入废液缸中,再用多于上清液三倍以上体积的乙腈洗涤晶体二次。
D.1.3 将晶体转移至另一个干净的烧杯中,加 200 ml 乙腈,加热沸腾,然后放在 40℃~60℃电热板上冷却,直至 95%的溶剂蒸发。
D.1.4 重复 D.1.2 洗涤过程和 D.1.3 重结晶过程一次。将纯化后的 DNPH 晶体放入 100ml 棕色玻璃瓶中,用密封胶带密封后 4℃冷藏保存。
D.2 纯化后 2,4-二硝基苯肼空白检验
取最后一次洗涤液(D.1.4),用乙腈稀释 10 倍,再加入 3.8 mol/L 高氯酸酸化后(每 100 ml洗涤溶液加 1 ml 3.8 mol/L 高氯酸),用 HPLC 分析。
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