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1、为什么填充柱色谱,先出峰很窄,后出峰很宽?
答:因为填充柱的内径大,样品进样正常展宽很小,所以峰宽主要是踏板理论展宽构成,而根据踏板理论,峰宽与保留时间成正比,所以后出的峰比较宽。
2、为什么毛细管柱,所有色谱峰基本一般宽?
答:因为毛细管柱内径小,样品进样正常展宽很大,而且因为柱效率(理论塔板数)高,所以塔板理论展宽与柱效率的平方根成反比,这个很小,所以峰宽主要由进样展宽构成,而组分的进样展宽在色谱柱内前进时保持不变,所以从柱尾流出来的时候,宽度主要由进样展宽决定,而所有组分的进样展宽基本一致,因此都是一样宽。
3、为什么会有溶剂聚焦现象?
答:因为溶剂聚焦是柱箱初始温度比溶剂沸点低,导致溶剂在柱头冷凝成液体,相当于增加了一层溶解度很大的固定液,导致分配比k增加很多倍,这样进样宽度就减小很多倍,所以色谱峰就窄了。
4、为什么有的难分离组分用薄膜柱子或者固定液涂泽量少的柱子来分析分离度大,而更多的组分用厚膜或者固定液涂泽量大的分离度高?
答:分离度等于保留时间之差除以峰宽之和的一半。根据速率理论,薄膜的柱子传质阻力小,所以柱效率高,分离度高。但根据进样宽度,厚膜柱子分配比k大,所以进样展宽小,色谱峰宽小,因此分离度高。啊。。。你这么说,谁分离度高都有道理了。是的,都有道理,所以两种情况都很常见。
一般来说,高含量组分用厚膜柱子好,可以减少进样宽度,增加分离度;低含量组分用厚膜柱子好,因为厚膜柱子允许更大的进样量,检出限高。啊?那么薄膜柱子就没存在的必要了?错。薄膜柱子柱流失小的多,而且对于含量不大不小的样品,也有更好的分离度。
好了,现在我们已经学习了正常展宽。通过正常展宽,我们知道:
正常峰宽W正常=W塔板+W进样。
其中:
W塔板=4σ=4t/√n
W进样=(V衬管/分流比a)/(V塔板×分配比k)
由于毛细管进行了分流,所以W进样被一定程度抑制,但仍然是毛细管色谱峰宽的主流。如果不分流,那么必然会有更大的峰宽。虽然是主流,但W塔板依然存在,所以随着时间增加W塔板的增加,峰宽也必然出现一定程度的加宽。
因此当我们需要抑制正常峰宽的时候,对于毛细管,应该主要考虑W进样,即减小分流不分流衬管体积、增加分流比、增加膜厚或制作溶剂聚焦,都是非常有效的。
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