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附录C
(资料性附录)
水质化学需氧量的测定分光光度法
C.1方法原理
水样在强酸性介质中,被重铬酸钾于150℃密闭回流进行氧化处理后,橙色的六价铬被还原成绿色的三价铬,当CODcr<150mg/L,在420nm处用分光光度法测定剩余六价铬的含量,当CODcr>150mg/L时,在600nm处测定反应生成的三价铬含量,根据仪器内置工作曲线,直接读得CODcr浓度值。
C.2适用范围
本方法可以测定地表水、生活污水、工业废水(包括高盐废水)的化学需氧量,水样因其化学需氧量值有高有低,因此在消解时应选择不同浓度的重铬酸钾消解液进行消解。可根据市售试剂说明书确定消解液的测量范围。
C.3仪器
C.3.1多功能分光光度计,或具有同等效果的其它分光光度计。
C.3.2恒温加热装置:COD反应器或或具有同等效果的其它反应器,温控150℃。
C.3.3专用反应管:16mm,具旋盖硬质玻璃管。
C.4试剂
除非另有说明,分析中均使用符合国家标准的分析纯试剂和蒸馏水。
C.4.1专用重铬酸钾0~150mg/L低量程消解液,适用于CODcr<150mg/L的水样。
C.4.2专用重铬酸钾0~1500mg/L高量程消解液,适用于CODcr>150mg/L的水样。
*可根据实际需要自配消解液,此时应使用自配消解液重新制作外置标准曲线。
C.5采样与保存
C.5.1采样与贮存样品均使用玻璃瓶。
C.5.2水样采集后,加入浓H2SO4调节水样使pH<2。样品应尽快分析,必要时应在4℃冷藏保存,并在48h内测定。
C.6分析步骤
C.6.1取样
当预计水样CODcr<150mg/L时,选用含消解液(C.4.1)的反应管,加入均匀性处理后的水样2mL,(若水样混浊,有固体颗粒,要先将水样置于粉碎机中进行水样均匀性处理,再取样),旋紧管盖,摇匀。当预计水样CODcr>150mg/L时,则选用含消解液(C.4.2)的反应管进行取样。
C.6.2加热回流
打开恒温加热装置开关,预热至150℃,放入反应管恒温回流2h,消解结束后,冷却至室温。
C.6.3测定
打开分光光度计开关,待仪器自检结束后,进入CODcr的测定程序,选择适合的代码,用经过消解的蒸馏水空白进行校零后,将样品管插入分光光度计内,即可以直接读取样品浓度值。
C.6.4干扰消除
当水样中氯离子含量在2000mg/L以上时,需稀释测定。
C.7结果表示
CODcr的浓度按下式计算:
式中:
——试样中CODcr的质量浓度,mg/L;
——稀释后试样中CODcr的质量浓度,mg/L;
f——稀释倍数。
测定结果取整数位,最多保留三位有效数字。
C.8精密度和准确度
见表C.1和表C.2。
C.9注意事项
C.9.1由于此法中CODcr反应管即作为比色皿用,所以在反应管洗涤时不宜采用试管刷,这样容易使管壁粗糙,影响比色,建议采用超声波清洗技术处理。
C.9.2反应管长期反复使用会使管壁粗糙,从而影响比色测定,这时应在实验前先用新的反立管作吸光度比较,在新、旧两管中分别加入5mL蒸馏水,测定相应波长下的吸光度,以新管为标准,若旧管吸光度值超出0.003A,此反应管应停止使用。
C.9.3若水样加热后仍显混浊,应在离心机上进行离心,使颗粒物沉降后再测定;也可以将反应管充分摇匀后静置,待其中颗粒物自然沉降后再进行测定。
附录D
(资料性附录)
水质总大肠菌群的测定多管发酵法
D.1适用范围
本标准规定了用多管发酵法测定生活饮用水及其水源、废水中的总大肠菌群。
本法适用于生活饮用水及其水源水、废水中总大肠菌群的测定。
D.2术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
D.2.1总大肠菌群
总大肠菌群指一群在37℃培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
D.3培养基与试剂
D.3.1乳糖蛋白胨培养液
D.3.1.1成分
A蛋白胨10g
C牛肉膏3g
C乳糖5g
D氯化钠5g
E溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L)1mL
F蒸馏水1000mL
D.3.1.2制法
将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于蒸馏水中,调整PH7.2-7.4,再加入1mL16g/L的溴甲酚紫乙醇溶液,充分混匀,分装于装有倒管的试管中,68.95kPa(115℃,101C)高压灭菌20min,储存于冷暗处备用。
D.3.2二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液
按上述乳糖蛋白胨培养液(D.3.1),除蒸馏水外,其他成分加倍。
D.3.3伊红美蓝培养基
D.3.3.1成分
A蛋白胨10g
C乳糖10g
3
C磷酸氢二钾2g
D琼脂20g~30g
E蒸馏水1000mL
F伊红水溶液(20g/L)20mL
G美蓝水溶液(5g/L)13mL
D.3.3.2制法
将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正pH为7.2,加入乳糖,混匀后分装,以68.95kPa(115℃,101C)高压灭菌20min。临用时加热融化琼脂,冷至50℃~55℃,加入伊红和美蓝溶液,混匀,倾注平皿。
D.3.4革兰氏染色液
D.3.4.1结晶紫染色液
A成分:
a结晶紫1g
C乙醇(95%,体积分数)20mL
c草酸胺水溶液(10g/L)80mL
C制法:将结晶紫溶于乙醇中,然后与草酸胺溶液混合。
D.3.4.2革兰氏碘液
A成分:
a碘1g
C碘化钾2g
c蒸馏水300mL
C制法:将碘和碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许,充分振摇,待完全溶解
后,再加蒸馏水。
D.3.4.3脱色剂
乙醇(95%,体积分数)。
D.3.4.4沙黄复染液
A成分:
a沙黄0.25g
C乙醇(95%,体积分数)10mL
c蒸馏水90mL
C制法:将沙黄溶解于乙醇中,待完全溶解后加入蒸馏水。
D.3.4.5染色法
A将培养18h~24h的培养物涂片。
C将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染1min,水洗。
C滴加革兰氏碘液,作用1min,水洗。
D滴加脱色剂,摇动玻片,直至无紫色脱落为止,约30s,水洗。
E滴加复染剂,复染1min,水洗,待干,镜检。
D.4仪器
D.4.1培养箱:36℃±1℃。
D.4.2冰箱:0℃~4℃。
D.4.3天平。
D.4.4显微镜。
D.4.5平皿:直径为9cm。
D.4.6试管。
D.4.7分度吸管:1mL,10mL。
D.4.8锥形瓶。
D.4.9小倒管。
D.4.10载玻片。
D.5检测步骤
D.5.1乳糖发酵试验
D.5.1.1取10mL水样接种到10mL双料乳糖蛋白胨培养液中,取1mL水样接种到10mL单斜乳糖蛋白胨培养液中,另取1mL水样注入到9mL灭菌生理盐水中,混匀后吸取1mL(即0.1mL水样)注入到10mL单斜乳糖蛋白胨培养液中,每一稀释度接种5管。
对已处理过的出厂自来水,需经常检验或每天检查一次的,可直接接种5份10mL水样双料培养基,每份接种10mL水样。
D.5.1.2检测水源水时,如污染较严重,应加大稀释度,可接种1,0.1,0.01mL甚至0.1,0.01,0.001mL,每个稀释度接种5管,每个水样共接种15管。接种1mL以下水样时,必须作10倍递增稀释后,取1mL接种,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌刻度吸管。
D.5.1.3将接种管置36℃±1℃培养箱内,培养24h±2h,如所有乳糖蛋白胨培养管都不产气产酸,则可报告为总大肠杆菌群阴性,如有产气产酸者,则按下列步骤进行。
DB31/199-201?
35
D.5.2分离培养
将产气产酸的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,于36℃±1℃培养箱内培养18h~24h,观察菌落形态,挑取符合下列特征的菌落作革兰氏染色、镜检和证实试验。
深紫黑色、具有金属光泽的菌落;
紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落;
淡紫黑色、中心较深的菌落。
D.5.3证实试验
经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌,同时接种乳糖蛋白胨培养液,置36℃±1℃培养箱中培养24h±2h,有产酸产气者,即证实有总大肠杆菌存在。
D.6结果报告
根据证实为总大肠杆菌群阳性的管数,查MPN(mostproCaClenumCer,最可能数)检索表,报告每100mL水样中的总大肠杆菌最可能数(MPN)值。稀释样品查表后所得结果应乘稀释倍数。如所有乳糖发酵管均阴性时,可报告总大肠杆菌未检出。
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