上海：《污水综合排放标准》（二次征求意见稿）

附录C

(资料性附录)

水质化学需氧量的测定分光光度法

C.1方法原理

水样在强酸性介质中，被重铬酸钾于150℃密闭回流进行氧化处理后，橙色的六价铬被还原成绿色的三价铬，当CODcr<150mg/L，在420nm处用分光光度法测定剩余六价铬的含量，当CODcr>150mg/L时，在600nm处测定反应生成的三价铬含量，根据仪器内置工作曲线，直接读得CODcr浓度值。

C.2适用范围

本方法可以测定地表水、生活污水、工业废水(包括高盐废水)的化学需氧量，水样因其化学需氧量值有高有低，因此在消解时应选择不同浓度的重铬酸钾消解液进行消解。可根据市售试剂说明书确定消解液的测量范围。

C.3仪器

C.3.1多功能分光光度计，或具有同等效果的其它分光光度计。

C.3.2恒温加热装置：COD反应器或或具有同等效果的其它反应器，温控150℃。

C.3.3专用反应管：16mm，具旋盖硬质玻璃管。

C.4试剂

除非另有说明，分析中均使用符合国家标准的分析纯试剂和蒸馏水。

C.4.1专用重铬酸钾0~150mg/L低量程消解液，适用于CODcr<150mg/L的水样。

C.4.2专用重铬酸钾0~1500mg/L高量程消解液，适用于CODcr>150mg/L的水样。

*可根据实际需要自配消解液，此时应使用自配消解液重新制作外置标准曲线。

C.5采样与保存

C.5.1采样与贮存样品均使用玻璃瓶。

C.5.2水样采集后，加入浓H2SO4调节水样使pH<2。样品应尽快分析，必要时应在4℃冷藏保存，并在48h内测定。

C.6分析步骤

C.6.1取样

当预计水样CODcr<150mg/L时，选用含消解液（C.4.1）的反应管，加入均匀性处理后的水样2mL，（若水样混浊，有固体颗粒，要先将水样置于粉碎机中进行水样均匀性处理，再取样），旋紧管盖，摇匀。当预计水样CODcr>150mg/L时，则选用含消解液（C.4.2）的反应管进行取样。

C.6.2加热回流

打开恒温加热装置开关，预热至150℃，放入反应管恒温回流2h，消解结束后，冷却至室温。

C.6.3测定

打开分光光度计开关，待仪器自检结束后，进入CODcr的测定程序，选择适合的代码，用经过消解的蒸馏水空白进行校零后，将样品管插入分光光度计内，即可以直接读取样品浓度值。

C.6.4干扰消除

当水样中氯离子含量在2000mg/L以上时，需稀释测定。

C.7结果表示

CODcr的浓度按下式计算：

式中：

——试样中CODcr的质量浓度，mg/L；

——稀释后试样中CODcr的质量浓度，mg/L；

f——稀释倍数。

测定结果取整数位，最多保留三位有效数字。

C.8精密度和准确度

见表C.1和表C.2。

C.9注意事项

C.9.1由于此法中CODcr反应管即作为比色皿用，所以在反应管洗涤时不宜采用试管刷，这样容易使管壁粗糙，影响比色，建议采用超声波清洗技术处理。

C.9.2反应管长期反复使用会使管壁粗糙，从而影响比色测定，这时应在实验前先用新的反立管作吸光度比较，在新、旧两管中分别加入5mL蒸馏水，测定相应波长下的吸光度，以新管为标准，若旧管吸光度值超出0.003A，此反应管应停止使用。

C.9.3若水样加热后仍显混浊，应在离心机上进行离心，使颗粒物沉降后再测定；也可以将反应管充分摇匀后静置，待其中颗粒物自然沉降后再进行测定。

附录D

(资料性附录)

水质总大肠菌群的测定多管发酵法

D.1适用范围

本标准规定了用多管发酵法测定生活饮用水及其水源、废水中的总大肠菌群。

本法适用于生活饮用水及其水源水、废水中总大肠菌群的测定。

D.2术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

D.2.1总大肠菌群

总大肠菌群指一群在37℃培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。

D.3培养基与试剂

D.3.1乳糖蛋白胨培养液

D.3.1.1成分

A蛋白胨10g

C牛肉膏3g

C乳糖5g

D氯化钠5g

E溴甲酚紫乙醇溶液（16g/L）1mL

F蒸馏水1000mL

D.3.1.2制法

将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于蒸馏水中，调整PH7.2－7.4，再加入1mL16g/L的溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管中，68.95kPa(115℃，101C)高压灭菌20min，储存于冷暗处备用。

D.3.2二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液

按上述乳糖蛋白胨培养液（D.3.1），除蒸馏水外，其他成分加倍。

D.3.3伊红美蓝培养基

D.3.3.1成分

A蛋白胨10g

C乳糖10g

3

C磷酸氢二钾2g

D琼脂20g～30g

E蒸馏水1000mL

F伊红水溶液（20g/L）20mL

G美蓝水溶液（5g/L）13mL

D.3.3.2制法

将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH为7.2，加入乳糖，混匀后分装，以68.95kPa(115℃，101C)高压灭菌20min。临用时加热融化琼脂，冷至50℃～55℃，加入伊红和美蓝溶液，混匀，倾注平皿。

D.3.4革兰氏染色液

D.3.4.1结晶紫染色液

A成分：

a结晶紫1g

C乙醇（95％，体积分数）20mL

c草酸胺水溶液（10g/L）80mL

C制法：将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸胺溶液混合。

D.3.4.2革兰氏碘液

A成分：

a碘1g

C碘化钾2g

c蒸馏水300mL

C制法：将碘和碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解

后，再加蒸馏水。

D.3.4.3脱色剂

乙醇（95%，体积分数）。

D.3.4.4沙黄复染液

A成分：

a沙黄0.25g

C乙醇（95％，体积分数）10mL

c蒸馏水90mL

C制法：将沙黄溶解于乙醇中，待完全溶解后加入蒸馏水。

D.3.4.5染色法

A将培养18h～24h的培养物涂片。

C将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。

C滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。

D滴加脱色剂，摇动玻片，直至无紫色脱落为止，约30s，水洗。

E滴加复染剂，复染1min，水洗，待干，镜检。

D.4仪器

D.4.1培养箱：36℃±1℃。

D.4.2冰箱：0℃～4℃。

D.4.3天平。

D.4.4显微镜。

D.4.5平皿：直径为9cm。

D.4.6试管。

D.4.7分度吸管：1mL，10mL。

D.4.8锥形瓶。

D.4.9小倒管。

D.4.10载玻片。

D.5检测步骤

D.5.1乳糖发酵试验

D.5.1.1取10mL水样接种到10mL双料乳糖蛋白胨培养液中，取1mL水样接种到10mL单斜乳糖蛋白胨培养液中，另取1mL水样注入到9mL灭菌生理盐水中，混匀后吸取1mL（即0.1mL水样）注入到10mL单斜乳糖蛋白胨培养液中，每一稀释度接种5管。

对已处理过的出厂自来水，需经常检验或每天检查一次的，可直接接种5份10mL水样双料培养基，每份接种10mL水样。

D.5.1.2检测水源水时，如污染较严重，应加大稀释度，可接种1，0.1，0.01mL甚至0.1，0.01，0.001mL，每个稀释度接种5管，每个水样共接种15管。接种1mL以下水样时，必须作10倍递增稀释后，取1mL接种，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌刻度吸管。

D.5.1.3将接种管置36℃±1℃培养箱内，培养24h±2h，如所有乳糖蛋白胨培养管都不产气产酸，则可报告为总大肠杆菌群阴性，如有产气产酸者，则按下列步骤进行。

DB31/199-201?

35

D.5.2分离培养

将产气产酸的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，于36℃±1℃培养箱内培养18h～24h，观察菌落形态，挑取符合下列特征的菌落作革兰氏染色、镜检和证实试验。

深紫黑色、具有金属光泽的菌落；

紫黑色、不带或略带金属光泽的菌落；

淡紫黑色、中心较深的菌落。

D.5.3证实试验

经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌，同时接种乳糖蛋白胨培养液，置36℃±1℃培养箱中培养24h±2h，有产酸产气者，即证实有总大肠杆菌存在。

D.6结果报告

根据证实为总大肠杆菌群阳性的管数，查MPN（mostproCaClenumCer，最可能数）检索表，报告每100mL水样中的总大肠杆菌最可能数（MPN）值。稀释样品查表后所得结果应乘稀释倍数。如所有乳糖发酵管均阴性时，可报告总大肠杆菌未检出。