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式中:W—样品中的二噁英浓度,ng/g;
ρ—测定液中的浓度,ng/ml;
F—稀释倍数;
V—测定液的体积,ml;
VE—萃取液的体积,ml;
VE’—萃取液分取体积,ml;
W0—取样量,g (干重)。
10.2 结果表示
当测定结果小于 0.1 ng/g 时,保留小数点后 2 位;当测定结果大于等于 0.1 ng/g 时,保留三位有效数字。
11 精密度和准确度
11.1 精密度
六家实验室分别对浓度为 1.70 ng/g、34.0 ng/g、142 ng/g 的飞灰统一样品进行了 6 次测定。实验室内相对标准偏差分别为:9.3%~15%、2.4%~6.9%、2.7%~7.7%;实验室间相对标准偏差分别为:10%、8.2%、7.8%;重复性限分别为:0.590 ng/g、5.10 ng/g 和 18.0 ng/g;再现性限分别为:0.590 ng/g、5.10 ng/g 和 18.0 ng/g。
六家实验室分别对浓度为 0.03 ng/g、5.20 ng/g、24.0 ng/g 的污泥统一样品进行了 6 次测定。实验室内相对标准偏差分别为:12%~17%、8.6%~11%、5.7%~10%;实验室间相对标准偏差为:17%、11%、9.8%;重复性限分别为:0.01 ng/g、1.50 ng/g 和 4.60 ng/g;再现性限分别为:0.01 ng/g、1.50 ng/g 和 4.60 ng/g。
11.2 准确度
六家实验室对浓度为 7.81 ng/g、10.4 ng/g 的飞灰标准样品进行了 6 次重复测定:相对误差的平均值为:2.4%、1.7%;
相对误差的标准偏差为:2.4%±6.5%、1.7%±6.9%。
六家实验室对浓度为 1.70 ng/g、34.3 ng/g、142 ng/g 的飞灰加标样品(加标量为 TEQ=2.41ng/g)进行了 6 次重复测定:
加标回收率分别为:90.5%~118%、91.3%~117%、92.1%~119%;
加标回收率最终值为:106%±7.8%、106%±4.6%、106%±4.8%。
六家实验室对浓度为 0.04 ng/g 的污泥加标样品(加标量为 TEQ=0.960 ng/g、TEQ=4.80 ng/g、TEQ=24.0 ng/g)进行了 6 次重复测定:
加标回收率分别为:90.6%~119%、90.6%~119%、88.7%-118%;
加标回收率最终值为:105%±4.2%、106%±4.5%、106%±3.5%。
12 质量保证和质量控制
12.1 试剂
前处理过程中所使用的试剂,浓缩 10000 倍时不能有二噁英检出,DMSO(6.7)空白的检测值必须小于标准溶液的检出限。
12.2 器具和装置
二噁英类生物检测法所使用的器具和装置切勿和其他化合物分析所使用的器具和装置混用,接触细胞的器具和装置须定期消毒以防止细胞污染。
12.3 细胞
12.3.1 细胞对二噁英的响应必须呈现一定的线性范围。
12.3.2 细胞必须可以稳定传代 20 次以上。
12.3.3 细胞在开始检测样品之前,其活性必须满足标准溶液的测定下限。假如采用 H1L6.1c2 细胞,则检测样品之前,细胞对标准溶液的测定下限必须达到 1.96 pg/ml。
12.4 空白试验
每 20 个样品或每批次(少于 20 个样品/批)应至少做一个实验室空白,所有空白测试结果中目标化合物的检测值必须低于标准溶液的测定下限,并且记录检测值,如果检测值异常高,则必须查明原因,并将采取的改进措施一一记录。
12.5 平行测定
按照样品数量的 10%进行平行测定,然后进行实验结果的比较,两次测定的结果相对标准偏差必须≤20%,并将相关数据进行记录。如果平行样品差异非常大,必须查找原因,采取措施,并将相关数据进行记录,然后重新分析。
12.6 回收率的确认
可以采取添加非同位素标记的标准物质的方式衡量整个过程的精密度,其加标的回收率必须满足 80%~120%。仅评估样品前处理过程中的精密度,可以按照 HJ 77.3 中的规定,添加同位素内标进行样品前处理,上机分析,计算同位素内标的回收率,同位素内标的回收率必须控制在 40%~130%之间。
12.7 质量控制图
在实际操作中,一般选择标准曲线中间点作为质控点,多次测量的质控点的浓度值计算平均值μ,标准偏差σ,每次测量值必须处于μ±2σ之内。
12.8 标准物质的测定
按照方法测定程序,进行样品的测定,然后对实验结果进行确认,标准物质的实验结果必须在±30%以内。如果发生异常,必须从样品的前处理开始查找原因,并采取相应的措施,将相关的数据进行记录。
12.9 检出限和定量范围的确认
检出限及定量范围必须每 6 个月确认一次,测定场合、仪器、条件发生变化后必须重新制作标准曲线以及定量范围。
13 废物处理
实验产生的有机废液和废物应分类收集,集中保管,并委托具有资质的单位处置。
14
附录 A
(规范性附录)
标准溶液的检出限及定量范围
A. 1 标准溶液的检出限以及定量范围的计算示例
配制表 A. 1 中的标准溶液浓度系列,然后进行 5 次以上的测定并定量,计算每个浓度点(毒性等价量)测定值的变异系数(CV%),以变异系数值为纵坐标,以浓度值为横坐标做图,规定与变异系数 30%相交点的浓度值为检出限值,变异系数 20%之间的浓度范围为定量范围,其范围内的最小浓度值为测定下限值。
对于标准物质的检出限以及定量范围,至少要每隔 6 个月进行 1 次确认,确认其是否发生变化。另外,当测定条件发生大幅度改变时(机器、试剂或者设施等发生变化以及测定负责人的发生变化等)也要进行确认。
A. 2 样品的检出限及测定下限样品的检出限以及测定下限,由样品量和经过预处理的最终样品的体积数值和反应液中的标准物质的检出限以及测定下限进行计算得出。由于样品的检出限以及测定下限,会因为样品的采集量以及最终检测液的量不同而不同,因此要对各个样品进行计算。
附录 B
(资料性附录)
方法的精密度和准确度汇总表
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