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1.2.4 不同油污浓度的原油降解试验 4种植物均采用混合接种方式即H3和H4联合接种,接种于5种油污浓度的土壤中进行原油降解试验,在种子长出子叶后的第7,14,21,28,35天分别测定原油降解率,探讨植物-真菌在不同油污浓度下的降解效果。
1.2.5 原油降解率测定 对每个处理分别在第7,14,21,28,35天时,取土样约5 g,用脱脂滤纸包好,烘干样品至恒质量,称质量。采用有机溶剂超声波萃取法提取总烃,步骤如下:土样放入50 mL离心管中,加入石油醚10 mL,震荡混匀,超声波萃取10 min,4 000 r˙min-1离心5 min,弃上清,重复1次;加入二氯甲烷10 mL,超声波萃取10 min,4 000 r˙min-1离心5 min,弃上清;加入三氯甲烷10 mL,超声波萃取10 min,4 000 r˙min-1离心5 min,弃上清,取出萃取后的土样,烘干至恒质量,用重量法测定原油的含量,计算原油降解率。
2 结果与分析
2.1 不同接种条件下植物与真菌联合降解的效果
选取1%油污浓度的土壤对4种植物与H3、H4分别进行单接种和混合接种试验,在第7,14,21,28,35天根据公式测定原油降解率。玉米、玉米草和黑麦草这3种植物在油污浓度为1%,单接种条件下的原油降解率均大于混合接种,玉米草和黑麦草与H3单接种的最终原油降解率稍高,而玉米与H4单接种处理对油污的降解率最大(86%),说明H4(葡萄穗酶菌Stachybotrys sp.)与玉米根系形成了良好的互惠共生体系,其根在土壤中生长、伸长会疏松土壤,为单一菌种的真菌利用石油创造有利条件,同时真菌的代谢产物能提高土壤中碱性磷酸酶的活性,促进玉米对磷的吸收而增进玉米生物量。而紫花苜蓿与H3和H4混合接种的降解效果明显高于单接种处理,且达到了几种处理中最高的降解率(88.7%)。紫花苜蓿属豆科植物,由于其根系发达而对逆境耐受能力较强,豆科植物根际分泌物中含有碱性磷酸酶成分,而磷素是根瘤固氮必需的,真菌侵入根瘤内部,对提高吸收磷素十分有利。真菌、紫花苜蓿与根瘤菌互惠共生,在土壤微环境中相得益彰。
2.2 油污浓度对植物与真菌联合降解原油的影响
在土壤油污浓度为0.5%~1.5%之间时,玉米的混合接种联合处理比另外3种植物具有较高的降解率,而在油污浓度较高的2%土壤中,紫花苜蓿表现出了良好的降解效果,而最终降解率可达87%。从整体趋势看,玉米、玉米草和黑麦草都在油污浓度为1%时表现出了最高的原油降解率,而紫花苜蓿的原油降解率随油污浓度的升高而升高,玉米、玉米草和黑麦草属禾本科植物,与原油降解真菌联合接种较适合于对油污浓度在1.5%以下的土壤进行生物修复,而紫花苜蓿与原油降解真菌则对油污浓度为2%甚至以上的土壤生物修复中将会有良好的表现。
3 结论与讨论
通过对玉米、玉米草、黑麦草和紫花苜蓿与2种原油降解真菌联合接种试验发现,紫花苜蓿与2种真菌联合接种的处理具有较好的降解效果,而且随着油污浓度的增加,降解效率越高,紫花苜蓿与真菌的联合接种体系在油污土壤的生物修复过程中是值得应用的,并且紫花苜蓿作为一种北方常用的牧草,其根部在土壤中修复环境污染的同时,地上部分也可方便地收割处理。能够与真菌联合修复油污土壤的草本、禾本科植物甚至农作物还有很多,可以预计,随着研究范围的不断扩大及方法的逐渐成熟,它在环境保护、修复污染土壤方面一定会有更广阔的应用前景。
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