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【组图】那些年我们用过的色谱柱二三事!

2015-10-10 09:07来源:实验与分析微信关键词:色谱柱色谱系统检测器收藏点赞

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色谱柱和流动相

1、在进行样品检测前,至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。流动相一定要使用色谱级别的溶剂。如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避免细菌产生。

2、流动相使用前需用微孔滤膜过滤,消除流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避免溶解度变化造成产生新的沉淀。不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱,以免柱性能损坏(添加5%的有机溶剂冲洗色谱柱,同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。还可以使色谱柱更容易平衡)。

3、流动相需脱气后使用,可避免因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。如果测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区别,应该使用过度分布的形式进行平衡。避免由于流动相的突然变化造成柱压增加过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。

色谱柱的再生:

(1).色谱柱使用一段时间后柱效会下降,这时可考虑对色谱柱进行再生。进行色谱柱再生时,建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵,而使用一个廉价的泵。

(2).在清洗开始和结束时各测一次柱效和容量因子等,以比较色谱柱性能的改善,确定清洗的效果。

(3).所用冲洗溶剂的体积应该是色谱柱体积的40~60倍。确保色谱柱中没有样品和缓冲溶液,清洗前所用的溶剂应与最初清洗时所用的溶剂相溶。应确保实验测试所用的流动相与色谱柱中最后的溶剂相溶。

(4).a)正相填料:用四氢呋喃冲洗、用甲醇冲洗、用四氢呋喃冲洗、二氯甲烷冲洗、用无苯正己烷冲洗。

b)反相填料:用HPLC级的水冲洗、冲洗时进四等份的200ul的二甲亚枫(DMSO)、用甲醇冲洗、用氯仿冲洗、用甲醇冲洗。

c)阴离子交换填料:用HPLC级的水冲洗、用甲醇冲洗、用氯仿冲洗。

d)阳离子交换填料:用HPLC级的水冲洗,在冲洗过程中进四等份的200ul的二甲亚枫(DMSO)、用四氢呋喃冲洗。

e)蛋白质凝胶过滤填料:去除蛋白质尺寸排阻介质中的污染物有二种清洗与再生方法。

弱保留蛋白质:用30mol/lpH3.0的磷酸盐缓冲液冲洗;

强保留蛋白质:用100%的水到100%的乙腈梯度洗脱60分钟。

色谱柱贮存方法:

(1).短期贮存:先用溶剂冲洗好色谱柱(如凝胶柱则用蒸馏水来冲洗),再把柱的两头用密封螺丝密封严。

(2).长期贮存:以色谱柱使用说明书中指定的溶剂充满色谱柱,再把柱两头用密封螺丝封严,防止溶剂挥发造成柱填料干缩,导致柱效严重降低。

(3).色谱柱应贮存在4℃以上的室温下,如置于0℃以下环境里,柱内会结冰,将导致柱效降低。

(4).警示:柱子不能贮存在水或水性溶剂中,否则会因柱内微生物滋生而导致损坏。

原标题:那些年我们用过的色谱柱二三事!
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