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泵的原理,我们看下下面这张示意图。
由四个柱塞杆分别作抽,推运动,吸取贮液瓶中的流动相。想想,医生打针,是否也是抽,推注射器的柱塞杆呢?为什么用了四个柱塞杆呢?目的是为了保持流量的稳定。也就是说,一边抽,一边在推,这样可以减小脉冲。同时,现代的泵的出口流液出,还有一个脉冲调节器,避免由于脉冲引起流速不稳定。我们看下,还有一个purge阀。考下大家purge是什么意思呢?对了是清洗的意思。这个派什么用处的呢?我们思考下,色谱系统不能用很大的流速的,如果用很大流速,那么仪器是否就会有损害?通俗地说,压力高了,设备爆了。一般我们更换流动相和排除流动相中的气泡,需要高流速,快速地更换流动相和排除气泡。那么,我们首先是开purge阀,这样流路走的是一条进废液的路,不会进入色谱柱系统,用5-9mL/min的流速快速更换流动相和排除气泡。更换好并且气泡没有了,那么要停泵,关闭阀门,以正常流速开启泵(例如1.0ml/min)。则流动相能够进入各个色谱系统中。
关于流动相,qingqingcao老师还是需要强调两点,色谱系统不能被污染,尤其是试剂中的固体颗粒是损害HPLC色谱分析的元凶。同时,流动相中的气泡,会是的压力不稳,所以,也要想方设法地排除掉。所以,对于流动相,我们必须对它进行处理。主要有两点。
流动相按照要求配制好。需要进行过滤和脱气。
过滤:对于流动相,我们使用微孔滤膜过滤。微孔滤膜有三种规格。有水系的,有机系的,有水系-有机系两用的。我们过滤水相一般使用水系滤膜。其孔径有0.45微米,0.22微米。一般选用0.45微米孔径。因为0.22微米过滤细菌的。有机相,比如甲醇,乙腈,四氢呋喃等使用有机系滤膜。不要搞混了。因为有机系过滤水相,水流不下来的。有机溶剂用水系滤膜,滤膜会被溶解,黏在多孔瓷板上。如果混合溶剂,一般可以选择水系-有机系两用滤膜。还有,试液一定需要过滤,以前用过的那些HPLC的甲醇,乙腈,过滤出来,上面会有一层浅浅的黄色固体颗粒物,也许会有灰尘等固体颗粒物。如果不幸进入色谱系统,那么会造成不必呀的麻烦。虽然色谱仪器可以拆洗,但是,拆洗总归费时费力吧。
同时流动相需要脱气(degas)。一般脱气有真空脱气,超声波脱气,吹He脱气,加热脱气。常用前两种。当然也有各自有缺点。
问一个问题:流动性为什么要脱气呢?
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