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“HPLC的进样系统
现在很少用到手动进样了吧。大部分都用自动进样。自动进样确实方便,只要安排好配制过的样品的位次,那么开动sequencerun就一个个地分析了。要不说说手动进样吧。进样设备是一个六通阀。其中要进样的时候,需要将六通阀转到load状态,由于六通阀后面装了一根定量环,所以,样品一定以大于三倍定量环体积地进去,这样,保证定量环中充满着样品,可以避免进样误差。打个比方,如果定量环是20μl的,那么我们打入>60μl的样品。然后转到inj状态,即可。还有需要注意的是,HPLC的进样针是平头针,而GC的进样针一定是尖头针。因为气相进样要刺穿隔垫,需呀尖头,而尖头容易划伤金属,所以HPLC用的是平头针。
“HPLC的分离系统
分离系统是HPLC的核心。我们现实生活中需要分析的样品都是混合物。所以,分离后在分析。比如我们分析酱油中肌苷酸鸟苷酸,那么酱油进行稀释处理,注入色谱仪,肌苷酸,鸟苷酸由于性质不同被分离成两个峰。同时酱油中其他物质也被分离。使得肌苷酸,鸟苷酸两个峰十分清楚地呈现。我们需要清楚的是,样品的测试要保证测试的物质被有效地分离,而不需要测试的物质,没有必要让其分离,这可以节省分析时间。关于色谱柱性能和判断,老师在下一讲详细讲述。
“HPLC的检测系统
HPLC的检测器有紫外-可见检测器,(UV-VIS),荧光检测器(FD),示差折光检测器(RI),MS检测器等等对于这些检测器,简单来说,是两点:被检测和浓度越大面积越大。对于示差折光,它是通用性检测器,但是灵敏度不够。测试一些没有紫外基团的物质,比如如糖等。
“HPLC的记录系统
HPLC记录系统主要记录色谱图,并且对色谱图进行面积计算(积分)。同时可以用软件计算出其他,比如峰宽,塔板数,拖尾因子等。同时也可以通过输入称样量和稀释倍数,计算出测试样品中各组分的含量。
总结本节课主要讲述了HPLC的各个部件,详细讲了HPLC泵工作原理,流动相处理等;进样器讲了六通阀等。因为HPLC主要是用的,所以,无需讲许多原理,只要讲为什么这么做就行了。
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