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如果排除溶剂因素和物质吸附或键合相尾部效应等因素,单纯从色谱柱填充效果来看,如果色谱柱前面填的紧密,后面填的疏松,即便有效塔板数合格,那么峰显示处后拖尾;如果色谱柱前面填得疏松,后面紧密,则峰显示前拖。所以,中国药典要求色谱柱拖尾因子要在【0.95,1.05】之间。
有许多朋友会讲,还有对称因子。因为在我国一般用拖尾因子即可,对称因子及10%峰高处峰宽比较对称性,只是不同国家定义不同要求不同而已,具体可以参考一些书籍,这里不展开叙述了。在色谱工作站,也有拖尾因子计算,我们选择5%处峰高处计算即可。
对于色谱柱需要给它做一个有效的体检卡,一般在体检卡上检测有效塔板数和拖尾因子即可,相关的方法,即上述叙述。
对于C18色谱柱清洗,一般的步骤是:洗去缓冲盐用不含盐的流动相冲洗,把缓冲盐洗涤干净,一般是20倍柱体积,也就是0.8-1.0ml/min洗涤各1.5-2小时,然后用乙腈或甲醇洗涤,20倍柱体积,也就是0.8-1.0ml/min洗涤2小时。两端用螺母封柱。一般我比较喜欢用乙腈保存。虽然乙腈毒性是大,但是,乙腈粘度小。
如果色谱柱真的不能用,我们还可以卸下柱前端的柱头,把筛板用异丙醇超声波超洗,挖去前段被污染的色谱填料,补上新的色谱填料,这样,色谱柱暂时还可以用一段时间。
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